正就读中学的少年迈尔斯（沙梅克·摩尔 Shameik Moore 配音）意外被一只遭受放射性污染的蜘蛛咬伤，随后身体发生奇特的变化。偶然机缘，他目睹了蜘蛛侠（克里斯·派恩 Chris Pine 配音）和犯罪头目金并（列维·施瑞博尔 Liev Schreiber 配音）的战斗。为了阻止金并利用时空对撞机扰乱宇宙，蜘蛛侠最终壮烈牺牲。可未过多久，来自平行宇宙的颓废的彼德·帕克（杰克·约翰逊 Jake M. Johnson 配音）出现在迈尔斯面前。为了阻止金并的阴谋，并帮助这个帕克返回自己的宇宙，他们闯入金并的老巢。在这一过程中，二人遭到章鱼博士和徘徊者的狙击。与此同时，来自其他宇宙的女蜘蛛侠、暗影蜘蛛侠、蜘猪侠、二次元蜘蛛妹相继出现。
他们合力与恶势力展开斗争……
纪录片
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谢尔盖·波卢宁,大卫·拉切贝尔,杰德·黑尔-克里斯多菲
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德鲁·巴里摩尔,莎拉·吉尔伯特,汤姆·斯凯里特,切瑞·拉德,Alan,Stock,Jeanne,Sakata,E.J.,Moore,J.B.,Quon,莱昂纳多·迪卡普里奥,Michael,Goldner,Charley,Hayward,泰姆·温特斯,Billy,Kane,Tony,Ervolina,玛丽·戈登·默里,Julie,Jay,Charla,Sampsel,Angel,Broadhurst,Randall,Caldwell,Tom,Ruben,Lisa,Passero,Lawrence,Levy
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